跑电泳常见条带问题分析

跑电泳常见条带问题分析 | 时间: June-5 17:45:45 | 分类:技术栏目

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一、微笑形区带(两边翘起 ,中间凹下): 

        形成原因:主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的 ,多出现于较厚的凝胶中。
        处理办法:待其充分凝固再做实验。
二、皱眉形区带(两边向下 ,中间鼓起):
        形成原因:主要出现在蛋白质垂直电泳槽中 ,一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。
        处理办法:可在两板之间加入适量缓冲液 ,以排除气泡。
三、区带拖尾:
        形成原因:主要是由样品溶解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
        处理办法:加样前离心 ;选择适当的样品缓冲液 ,加适量样品促溶剂 ;电泳缓冲液放置时间过长 ,重新配制 ;降低凝胶浓度。
四、区带出现纹理:
        形成原因:主要是由样品不溶性颗粒引起的。
        处理办法:加样前离心 ,加适量样品促溶剂。
五、鬼带:
        形成原因:主要是由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性 ,致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合 ,聚合成大分子 ,其分子量比目标区带大 ,有时不能进入分离胶。但它与目标区带有相同的免疫学活性 ,在免疫印迹反应中可见 ,能与目标区带对应的抗体作用。
        处理办法:加热煮沸后再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇 ,以补充不足的还原剂 ;加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。
六、溴酚蓝不能起到指示作用:
        形成原因:实验中常遇到溴酚蓝已跑出板底 ,但蛋白质却还未跑下来的现象 ,主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。
        处理办法:更换正确pH值的Buffer ,降低分离胶浓度。
七、区带很粗:
        形成原因:主要是由于浓缩胶未浓缩好。
        处理办法:适当增加浓缩胶长度 ,保证浓缩胶贮液的pH正确(6.8) ,适当降低电压。
八、电泳电压很高而电流很低:
        形成原因:主要是由于电泳槽没有正确装配 ,电流未形成通路。
        处理办法:电泳槽正确装配。
 

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